Περιγραφή:

Χρησιμοποιώντας τη χαρτογράφηση πεπτιδίων, μπορούν να εντοπιστούν λεπτές αλλαγές στην πρωτογενή δομή μιας πρωτεΐνης ή αντισώματος που μπορεί να επηρεάσουν τη δραστηριότητα της πρωτεΐνης ή την συγγένεια σύνδεσης.Η χαρτογράφηση πεπτιδίων με LC-MS/MS είναι μία από τις πιο ισχυρές ποιοτικές δοκιμές για την επιβεβαίωση της πρωτογενούς αλληλουχίας πρωτεϊνών ή αντισωμάτωνΗ υπηρεσία αυτή μπορεί να χρησιμοποιηθεί για τη σύγκριση διαφορετικών παρτίδων των ίδιων πρωτεϊνών, αντισωμάτων ή βιοομοίων.

Υπηρεσία ανάλυσης χαρτογράφησης πεπτιδίων με LC-MS/MS περιλαμβάνει:

• Το αντισώμα/πρωτεΐνη που παρουσιάζεται ως ενδιαφέρουσα ουσία αποκαθαρίζεται, μειώνεται και χωνεύεται με ένα πρωτεολυτικό ένζυμο όπως το LysC ή η τριψίνη.
• Προαιρετικό: χρησιμοποιείται ένα δεύτερο πρωτεολυτικό ένζυμο για την αύξηση της κάλυψης της αλληλουχίας της πρωτεΐνης.
• Το χρωματογράφο της απορρόφησης UV παράγεται σε UV 214 nm.
• Μετά τον διαχωρισμό με HPLC, η περαιτέρω ανάλυση πραγματοποιείται με υψηλής ευκρίνειας φάσμα μαζών (Thermo Fisher Orbitrap Velos ή Fusion).
• Δημιουργείται ένας χάρτης πεπτιδίων της πρωτεΐνης για σύγκριση με μια πρωτεΐνη αναφοράς.
• Οι κορυφές αναλύονται στην πρωτογενή ακολουθία.
• Προαιρετικά (δύο ή περισσότερα δείγματα): πραγματοποιείται αξιολόγηση της συγκρισιμότητας για την αξιολόγηση της διακύμανσης από παρτίδα σε παρτίδα μεταξύ πρωτεϊνών ή για τη σύγκριση βιοομοειδών.

Πληροφορίες που πρέπει να παραδοθούν:

• Επιβεβαίωση των πρωτογενών αλληλουχιών (καλύψη αλληλουχίας: 60-90% με χρήση ενός ενζύμου· > 98% με χρήση δύο ή περισσοτέρων ενζύμων).
• Γλυκοπροφίλ των ολιγοσακχαριδίων που συνδέονται με το N (ετερογένεια των γλυκομορφών και προσέγγιση της καταλαμβανόμενης περιοχής).
• Προσδιορισμός και κατά προσέγγιση ποσοτικοποίηση των PTM, όπως η αποαμιδίωση, οξείδωση,Ο σχηματισμός πυρογλουταμιού σε N-θεραπεία και η επεξεργασία Lys σε C-θεραπεία (μπορεί να ανιχνευθεί τροποποιημένη θέση αμινοξέων και ποσοστιαία τροποποίηση).
• Εκτίμηση ομοιότητας μεταξύ διαφορετικών παρτίδων.
• Εκτίμηση της συγκρισιμότητας για τα βιοομοιώματα.

Επεξεργασία δείγματος: αποσιώπηση, μείωση/αλκυλίωση και ενζυμική πέψη, ακολουθούμενη από LC-MS ή LC-MS/MS.