Q
Πώς να συντηρήσει τα συντεθειμένα πεπτίδια;
Τα πεπτίδια πρέπει γενικά να αποθηκευτούν μακρυά από το φως για τη μακροπρόθεσμη αποθήκευση, και πρέπει να αποθηκευτούν σε -20 βαθμούς, και μπορούν να αποθηκευτούν σε 4 βαθμούς για το βραχυπρόθεσμο. Μπορέστε να σταλείτε στις χρονικές περιόδους θερμοκρασίας δωματίου για συντομία. Τα πεπτίδια είναι σταθερά σε -20°C, ειδικά όταν λυοφιλοποιούνται και αποθηκευμένος desiccator. Τα λυοφιλοποιημένα πεπτίδια μπορούν να κρατηθούν στη θερμοκρασία δωματίου πρίν εκθέτουν τους στον αέρα. Αυτό θα μειώσει την επίδραση της υγρασίας, και όταν η λυοφιλοποίηση δεν είναι δυνατή, η καλύτερη προσέγγιση είναι να αποθηκευτούν τα μικρά λειτουργώντας δείγματα. Για τα πεπτίδια που περιέχουν Cys, συνερχόμενο ή TrP, deoxygenation ο απομονωτής είναι ουσιαστικός για τη διάλυσή τους, επειδή αυτό το πεπτίδιο μπορεί να οξειδωθεί εύκολα αεροπορικώς, και το άζωτο ή το αέριο υδρογόνο που διατρέχει αργά του πεπτιδίου πρίν σφραγίζει το μπουκάλι θα μειώσει επίσης την οξείδωση. Τα πεπτίδια που περιέχουν το τζιν ή Asn είναι επίσης επιρρεπής σε υποβάθμιση, και όλα αυτά τα πεπτίδια έχουν μια περιορισμένη διάρκεια ζωής έναντι εκείνων χωρίς αυτούς προβληματική απλότητα.
Q
Εάν το πεπτίδιό μου είναι 95% καθαρό, ποιο είναι το άλλο 5%;
Η αγνότητα πεπτιδίων καθορίζεται συνήθως από το HPLC χρησιμοποιώντας μια κλίση του ακετονιτριλίου 1% ανά λεπτό. Κατά τη διάρκεια της διαδικασίας σύνθεσης, η αποδοτικότητα διασύνδεσης μεταξύ των αμινοξέων μπορεί όχι πάντα να φθάσει σε 100%, παράγοντας κατά συνέπεια μια σειρά ακαθαρσιών με τα ελλείποντα αμινοξέα. Οι περισσότερες από αυτές τις αμινο όξινος-διαγραμμένες ακαθαρσίες αφαιρέθηκαν κατά τη διάρκεια του καθαρισμού, αλλά μερικές είχαν τα χρωματογραφικά σχεδιαγράμματα που πολύ εμοίασαν με το πεπτίδιο στόχων. Τα πεπτίδια μολυσματικών παραγόντων με αυτές τις διαγραφές αμινοξέος που παραμένουν στο δείγμα πεπτιδίων αποτελούν την παραμονή λίγα τοις εκατό.
Q
Πώς τα πεπτίδια καθαρίζονται;
Ο καθαρισμός πεπτιδίων χρησιμοποιεί γενικά μια αντίστροφης φάσης στήλη (όπως C8, C18, κ.λπ.), 214nm. Το σύστημα απομονωτών είναι συνήθως διαλυτικό περιέχον TFA, pH 2,0. Αποθηκεύστε το Α περιέχει 0,1% TFA σε H2O, και ο απομονωτής Β περιέχει 1% TFA/ACN/pH2.0. Διαλύστε με τον απομονωτή Α πριν από τον καθαρισμό εάν η διάλυση δεν είναι καλή, διαλύστε με τον απομονωτή Β και αραιώστε έπειτα με τον απομονωτή Α για τα ιδιαίτερα υδροφοβικά πεπτίδια, μερικές φορές ένα μυρμηκικό οξύ μικρού ποσού ή το οξικό οξύ πρέπει να προστεθεί. Ανάλυση HPLC των ακατέργαστων προϊόντων πεπτιδίων, εάν το πεπτίδιο δεν είναι μακρύ (κάτω από 15aa), θα υπάρξει γενικά μια κύρια αιχμή, και η κύρια αιχμή είναι συνήθως το ολόκληρο προϊόν για τα μακριά πεπτίδια άνω των 20aa, εάν δεν υπάρχει καμία κύρια αιχμή, το HPLC πρέπει να χρησιμοποιηθεί με τη μάζα για να καθορίσει το μοριακό βάρος, και να καθορίσει έπειτα ποια αιχμή είναι το πεπτίδιο που συντίθεται.
Q
Πώς θα έπρεπε οι άκρες του πεπτιδίου να αντιμετωπιστούν; Το κρατήστε ελεύθερο ή το εμποδίστε;
Τα πεπτίδια χρησιμοποιούνται για να μιμηθούν τις πρωτεΐνες. Προκειμένου να μληθεί η απόδοση των πρωτεϊνών, πρέπει να συνθέσουμε polypeptides με τις παρόμοιες δομές και τις δαπάνες στις πρωτεΐνες. Όταν ένα πεπτίδιο «αποκόπτει» από μια πρωτεΐνη, ο αριθμός δαπανών και στις δύο άκρες θα είναι διαφορετικός από αυτόν της πρωτεΐνης σωμάτων γονιδίων. Πρέπει να αλλάξουμε τη compositing στρατηγική για να τους καταστήσουμε συνεπείς. Γενικά: Εάν η ακολουθία είναι από το γ-τέρμα της πρωτεΐνης, προστατεύστε το ν-τέρμα από την ακετυλίωση εάν είναι μια ακολουθία από το ν-τέρμα της πρωτεΐνης, προστατεύστε το γ-τέρμα από το amidation εάν είναι από το μέσο μέρος της πρωτεΐνης, χρησιμοποιήστε την ακετυλίωση και το amidation για να προστατεύσει τις και τις δύο άκρες προστατεύεται.
Q
Ποια είναι τα πλεονεκτήματα των γόμφος-τροποποιημένων πεπτιδίων;
Η τροποποίηση γλυκόλης πολυαιθυλενίου είναι να προστεθεί υψηλός - μοριακό πολυμερές σώμα (γλυκόλη αιθυλενίου) στο μόριο στόχων μέσω της ομοιοπολικής σύνδεσης. Η τροποποίηση γλυκόλης πολυαιθυλενίου εξαπατά το ανοσοποιητικό σύστημα του κυττάρου οικοδεσποτών με την κάλυψη polypeptide, ενισχύει τη θεραπευτική επίδραση polypeptide, και αυξάνει τη διαλυτότητα και τη βιολογική διαθεσιμότητα των υδροφοβικών φαρμάκων. Μπορεί επίσης να παρατείνει την κυκλοφορία των πεπτιδίων με τη μείωση της νεφρικής εκκαθάρισης.
Q
Τι θα έπρεπε να πληρωθεί την η προσοχή κατά εισαγωγή της φθορισμού τροποποίησης στα πεπτίδια;
Ks-Β το πεπτίδιο προτείνει έναν συνδετικό εκδότη μεταξύ του polypeptide μορίου και της φθορισμού τροποποίησης, τα οποία μπορούν να μειώσουν τον αντίκτυπο της φθορισμού τροποποίησης στο δίπλωμα polypeptide και της σύνδεσης στο δέκτη. Εντούτοις, εάν ο σκοπός της τροποποίησης φθορισμού είναι να ποσολογηθεί η μετανάστευση φθορισμού μεταξύ των διαφορετικών δομών, δεν συστήνεται να εισαχθεί ο συνδετικός εκδότης.
Q
Τι θα έπρεπε να πληρωθεί η προσοχή κατά τη σχεδιασμό των phosphorylation-τροποποιημένων πεπτιδίων;
Ks-Β το πεπτίδιο συστήνει ότι κατά σχεδιασμό phosphorylation των τροποποιήσεων, phosphorylation την τροποποίηση δεν πρέπει να υπερβεί 10 αμινοξέα από το ν-τέρμα για να αποφύγει μια μείωση στην αποδοτικότητα συζεύξεων.
Q
Μπορείτε να κάνετε το δ-πεπτίδιο; Πόσοι τύποι φυσικών αμινοξέων δ-τύπων υπάρχουν;
Μπορέστε. Υπάρχουν 19 είδη φυσικών αμινοξέων δ-τύπων. Το Gly στα φυσικά αμινοξέα δεν έχει καμία chiral δομή, και η δομή δ-τύπων άλλων φυσικών αμινοξέων μπορεί να επιλεχτεί στο πεπτίδιο Keshengjing. Για τις λεπτομέρειες, παρακαλώ συνδεθείτε στον επίσημο ιστοχώρο για να δείτε τον κατάλογο ειδικών αμινοξέων.
Q
Πόσες phosphorylation περιοχές μπορεί να περιληφθεί στη σύνθεση πεπτιδίων ks-β;
Γενικά, υπάρχουν το πολύ-πολύ τρία, και πρέπει να αναλυθεί σύμφωνα με τη συγκεκριμένη ακολουθία.
Q
Γιατί polypeptides υποβάλλονται στην ν-τελική ακετυλίωση και την γ-τελική τροποποίηση amidation;
Τέτοιες τροποποιήσεις μπορούν να παρέχουν στη polypeptide ακολουθία τις ιδιότητες της εγγενούς πρωτεΐνης.